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Pigmenti fotosintetici

Scuola secondaria di secondo gradoBiologiaRappresentazione illustrativa della ripartizione dei pigmenti in cromatografia a fase normale, con avanzamento del solvente proporzionale alla radice quadrata e misurazioni dirette dell’Rf con il righello

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Informazioni su questo esperimento

Sviluppa una miscela di quattro pigmenti fogliari, segna il fronte del solvente e misura direttamente le distanze di migrazione sul cromatogramma. Confronta le fasi stazionarie, la polarità del solvente e la quantità di campione applicata, distinguendo i valori del modello dalle tue misurazioni con il righello.

Obiettivi di apprendimento

  • Misura entrambe le distanze dalla linea del campione originale.
  • Calcola l’Rf e distinguilo dalla distanza percorsa.
  • Spiega perché la quantità di campione applicata e le condizioni del solvente influenzano la qualità della separazione.

Come si usa

  1. 1Sviluppa la miscela iniziale, interrompi il processo e segna il fronte del solvente.
  2. 2Seleziona un pigmento e trascina le due maniglie del righello per misurarne l’Rf.
  3. 3Registra il risultato prima di riprendere lo sviluppo o modificare la miscela.
  4. 4Confronta un solvente più polare, un’altra fase stazionaria e una quantità maggiore di campione applicata.

Il modello

Entrambe le distanze sono misurate dalla stessa origine del campione.
Il coefficiente di ripartizione indicato controlla la frazione di migrazione illustrativa.

Ipotesi

  • Quattro pigmenti identificati hanno valori Rf di riferimento indicativi pari a 0,95, 0,65, 0,50 e 0,35. Non sono standard universali di identificazione né costanti misurate per un solvente specifico.
  • Nella ripartizione in fase normale, una maggiore polarità del solvente riduce la ritenzione. La piastra adsorbente alternativa moltiplica i coefficienti di ritenzione per 1,4.
  • Il fronte del solvente avanza in proporzione alla radice quadrata del tempo e si ferma a 80 mm. Il centro di ogni banda rimane dietro al fronte; le bande visualizzate, di forma approssimativamente gaussiana, si allargano con il tempo di sviluppo e il carico.
  • Le distanze misurate con il righello sono misurazioni modificabili, distinte dai valori di ripartizione del modello. Rapporti superiori a uno suggeriscono di controllare il posizionamento.
  • Modificando il tempo di sviluppo si cancellano i segni attuali del righello. Le registrazioni nel quaderno delle misurazioni restano invariate. Un pigmento rimosso dalla miscela non ha alcuna banda da misurare.

Provalo in classe

  1. Q1Perché la distanza del fronte del solvente deve essere misurata dall’origine anziché da un pigmento?
  2. Q2Perché il centro di una banda allargata è più difficile da misurare?

Domande frequenti

I valori di Rf iniziali possono identificare i pigmenti in un solvente reale qualsiasi?

No. L'Rf dipende dal solvente e dalla fase stazionaria. I valori di riferimento sono esplicitamente illustrativi.

Perché il mio Rf misurato può differire dall'Rf del modello?

Le maniglie del righello sono intenzionalmente strumenti di misurazione indipendenti. Il loro posizionamento può introdurre errori di misurazione.